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本制品用于模板RNA的等温扩增检测，提供快速一步法的解决方案。该预混液采用Bst 2.0 DNA聚合酶，搭配经过优化的Buffer及BalbScript III反转录酶，可快速、方便地进行RT-LAMP反应。该预混液包含酶Mix、dNTP、反应Buffer、保护剂、耐热型反转录酶以及荧光染料等在内的所有必需组分，只需加入用于等温扩增的引物和模板即可，通常在30min内便可得到扩增结果。本制品不含甘油及其他影响冻干的成分，包含保护剂、赋形剂等试剂，可用于冻干样品的制备。

• 该产品可用于制作冻干粉或冻干小球；
  
• 简化试剂添加过程，缩短时间；
  
• 可与其它检测技术搭配使用；
  
• 可进行实时定量检测。

• 建议试剂预混、模板添加和检测三个过程尽可能在不同的密闭区域进行，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染；
  
• 该Mix含荧光染料，可直接进行实时定量反应（建议65℃反应，每1min收集一次荧光）；
  
• 如后续进行电泳等开盖操作，务必进行热失活，以防污染；
  
• 可根据具体实验模板量可调整反应温度和时间；
  
• 本制品中已含有冻干辅料，可直接进行冻干，若需增加其他冻干辅料，需根据实际检测数据评估后增加。

• RT-LAMP冻干体系制备
  
  • 将2×RT-LAMP MasterMix(含染料，可冻干)预混以下试剂，轻轻涡旋并瞬时离心；
    
  • 根据以下常用体系进行冻干体系配制：
    

    成分	用量
    2×RT-LAMP MasterMix(含染料，可冻干)	12.5μL
    10×Primer Mix	2.5μL
    RNase-Free Water	至20μL

    注：10×Primer Mix包含2μM F3/B3，16μM FIP/BIP和4μM LF/LB。
    
  • 将上述液体样品进行冻干；
    
  • 冻干后样品由RNase Free Water复溶至20μL后，再加入5μL的模板进行反应，反应时总体积为25μL；
    
    • 若冻干形式为冻干球，建议复溶后就进行实验反应；若冻干形式为多次反应体系样品，建议复溶后剩余试剂可置于-20℃保存，下次实验融化后直接使用即可。
  • 将配制完成的反应体系，轻轻涡旋并离心，60～65℃反应20～60min。
    
    • 热失活条件：80℃反应10min。
• RT-LAMP常用反应体系
  
  • 按下表加入各成分，轻轻涡旋并瞬时离心。
    

    成分	用量
    2×RT-LAMP MasterMix	12.5μL
    10×Primer Mix	2.5μL
    模板RNA	X μL
    RNase-Free Water	至25μL

    注：10×Primer Mix包含2μM F3/B3，16μM FIP/BIP和4μM LF/LB
    
  • 将配制完成的反应体系，轻轻涡旋并离心，60～65℃反应20～60min；
    
  • 热失活条件：80℃反应10min。